Jackson ImmunoResearch propose désormais les Alexa Fluor® 555 et 568 conjugués à ses anticorps secondaires, rendant ainsi plus simple la sélection des colorants pour le canal orange.

Lors du développement d’une expérience d’immunofluorescence avec plusieurs cibles, et afin éviter les interférences entre les cibles, il est essentiel d’utiliser :

  • des fluorochromes distincts spectralement
  • et des anticorps secondaires spécifiquement adsorbés

Les deux nouveaux fluorochromes (Alexa Fluor® 555 et 568), brillants et stables, complètent la gamme existante d’anticorps secondaires conjugués avec les Alexa Fluor®, offrant ainsi deux nouvelles options pour le canal orange.

Ces anticorps, disponibles en différentes spécificités (liste anticorps 555, 568), sont conçus pour minimiser les réactions croisées avec d’autres espèces.

Les deux protocoles ci-dessous de coloration par immunofluorescence à quatre couleurs illustrent l’utilité de ces conjugués.

1. Immunofluorescence à quatre couleurs avec le DAPI, l’Alexa Fluor® 488, l’Alexa Fluor® 555 et l’Alexa Fluor® 647

Fluorophores Excitation Peak (nm) Emission Peak (nm)
DAPI 350 465
Alexa Fluor®488 493 519
NEW!   Alexa Fluor® 555 552 572
Alexa Fluor® 647 651 667

 

Les caractéristiques spectrales des trois Alexa Fluor® dans ce panel (Figure 1) permettent de les combiner avec le DAPI, un colorant nucléaire pour obtenir une immunofluorescence compatible à quatre couleurs (figure 2).

Spectres d'excitation et d'émission du DAPI, de l’Alexa Fluor® 488, de l’Alexa Fluor® 555, et de l’Alexa Fluor® 647

Figure 1 : Spectres d’excitation et d’émission du DAPI, de l’Alexa Fluor® 488, de l’Alexa Fluor® 555, et de l’Alexa Fluor® 647

 

Immunomarquage indirect à quatre couleurs des cellules épithéliales humaines (HEp-2)

Figure 2 : Immunomarquage indirect à quatre couleurs des cellules épithéliales humaines (HEp-2). La prolifération cellulaire est visualisée en vert, en utilisant un anticorps anti-Ki-67 de lapin suivi d’un anticorps d’âne anti-lapin conjugué à l’Alexa Fluor® 488 (711-545-152). Les microtubules sont visualisés en jaune, utilisant un anticorps anti-α tubuline de souris suivi d’un anticorps d’âne anti-souris IgG conjugué à l’Alexa Fluor® 555 (715-565-150). Les structures de l’appareil de Golgi sont visualisées en rouge, utilisant un anticorps anti-GM130/GOLGA2 humain de mouton, suivi d’un anticorps d’âne anti-mouton IgG conjugué à l’Alexa Fluor® 647 (713-605-147). La couleur bleue correspond au marquage nucléaire par le DAPI.

 

2. Immunofluorescence à quatre couleurs utilisant le DAPI, l’Alexa Fluor® 488, l’Alexa Fluor® 568 et l’Alexa Fluor® 647

Fluorophores Excitation Peak (nm) Emission Peak (nm)
DAPI 350 465
Alexa Fluor®488 493 519
NEW!   Alexa Fluor® 568 577 602
Alexa Fluor® 647 651 667

 

Un autre multimarquage à quatre couleurs en l’immunofluorescence inclut avec le DAPI l’Alexa Fluor® 488, 568 et 647 (Figure 3). Le marquage de protéines intracellulaires de cellules épithéliales humaines (HEp-2) illustre cette configuration (figure 4).

Spectres d'excitation et d'émission du DAPI de l’Alexa Fluor® 488 de l’Alexa Fluor® 568 et de l’Alexa Fluor® 647

Figure 3 : Spectres d’excitation et d’émission du DAPI de l’Alexa Fluor® 488 de l’Alexa Fluor® 568 et de l’Alexa Fluor® 647.

 

Immunomarquage indirect à quatre couleurs de cellules épithéliales humaines (HEp-2)

Figure 4 : Immunomarquage indirect à quatre couleurs de cellules épithéliales humaines (HEp-2). Prolifération cellulaire visualisée en vert, en utilisant l’anti-Ki-67 de lapin suivi de l’âne anti-lapin IgG (H+L) conjugué à l’Alexa Fluor® 488 (711-545-152). Les microtubules sont visualisés en jaune, à l’aide de l’anti-α-tubuline de souris suivi de l’anticorps d’âne anti-souris IgG (H+L) conjugué au Alexa Fluor® 568 (715-575-151). Le contact cellule-cellule est visualisé en rouge à l’aide de l’anti-E-Cadhérine de chèvre, suivi de l’anticorps d’âne anti-chèvre IgG (H+L) conjuguée à l’Alexa Fluor® 647 (705-605-147). La couleur bleue correspond au marquage nucléaire par le DAPI.

 

Références

  • Chang, S. H., Hong, S. H., Jiang, H. L., Minai-Tehrani, A., Yu, K. N., Lee, J. H., Kim, J. E., Shin, J. Y., Kang, B., Park, S., Han, K., Chae, C., & Cho, M. H. (2012). GOLGA2/GM130, Cis-Golgi matrix protein, is a novel target of anticancer gene therapy. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy, 20(11), 2052–2063. https://doi.org/10.1038/mt.2012.125
  •   Scholzen, T., & Gerdes, J. (2000). The Ki-67 protein: from the known and the unknown. Journal of cellular physiology, 182(3), 311–322. https://doi.org/10.1002/(SICI)1097-4652(200003)182:3<311::AID-JCP1>3.0.CO;2-9

Notes : Les colorants fluorescents Alexa Fluor® sont une marque déposée de Life Technologies Corp. Ils sont fournis dans le cadre d’un accord entre Life Technologies Corp et Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. La fabrication, l’utilisation, la vente ou l’importation de ces colorants sont vendues conformément à une licence de Life Technologies Corp pour l’utilisation de sa technologie de colorants fluorescents.

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